1、材料與方法
1.1精液采集 假陰道法常規采精，要求精液顏色、氣味正常，PH值6.4—6.8，密度每毫升15億以上，活力0.75以上。采得的精液根據密度、活力按1∶2—5的比例稀釋。
1.2稀釋液 A方：乳糖6克、檸檬酸鈉1.5克、蒸餾水100毫升。B方：乳糖3.8克、葡萄糖2.6克、檸檬酸鈉1.3克、蒸餾水100毫升。C方：乳糖4.6克、葡萄糖3.1克、檸檬酸鈉1.5克、蒸餾水100毫升。取A方、B方液各80毫升，C方液105毫升，分別加入卵黃20毫升，甘油5毫升，青、鏈霉素各10萬單位。
1.3平衡 在冰箱下層溫度1-4℃的條件下,將稀釋后經封閉的精液置入進行平衡。
1.4凍精顆粒的制作 采用鋁盒氟板制凍法，將氟板浸入盛有液氮的鋁盒內，待沸騰停止后，將氟板取出置于液氮上方2—3厘米，即可滴凍，劑量為每顆粒0.1毫升。
1.5解凍 采用水浴快速解凍，將含有1.8—2.9%檸檬酸鈉解凍液0.5毫升置入試管內在45至60℃的溫水中浴熱1分鐘，將冷水顆粒投入試管內，經搖動溶化至2/3時取出，輕搖至全部溶化。
1.6輸精 采用陰道輸精和子宮頸口輸精兩種方法。
2、試驗結果
2.1稀釋液的篩選
用三種不同稀釋液進行冷凍效果比較試驗，從解凍后活率及復蘇率兩個指標來看，以C方效果最好，多次重復解凍活率均在45%以上。與A 方、B方比較，差異極顯著（P<0.01），結果見表1。
表1 不同稀釋液冷凍效果比較 (單位：%)
| 配方代號 | 重復次數 | 原精活率 | 凍前活率 | 解凍活率 | 復蘇率 |
| A方 | 8 | 83 | 65 | 22 | 29.73 |
| B方 | 15 | 81.8 | 71.7 | 27 | 35.34 |
| C方 | 24 | 82.4 | 78.6 | 49.7 | 61.97 |
2.2冷凍技術試驗
2.2.1不同平衡時間對冷凍效果的影響 在利用尿素進行降溫平衡的特定條件下，15分鐘、30分鐘、1小時、1.5小時、2小時、3小時6種平衡時間的精子復蘇率分別為46.67%、52.63%、64.52%、60%、60.8%和55.17%，以平衡1小時的解凍活率最高，15分鐘、30分鐘最低。隨著平衡時間的逐漸延長，解凍活率有逐漸延長，解凍活率逐漸下降的趨勢。
2.2.2氟板與液面距離對冷凍效果的影響 在氟板距液氮面1、2、3、4厘米的條件下，取原精活力0.75，平衡后活力0.7時精液分別進行冷凍，重復觀察15次，凍后活力分別為0.4、0.55、0.45、0.4，以氟板距液氮面2厘米冷凍效果最好，精子復蘇率達75.86%，分別比1厘米、3厘米、4厘米高20.69%、13.79%、20.69%，但統計學分析，差異不顯著（P>0.05）。
2.2.3不同水溫對凍精解凍活率的影響 分別利用35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃8個不同梯度的水溫對冷凍顆粒進行解凍，結果45—60℃的水溫取得精子復蘇率74.6%的解凍效果，與35℃的解凍效果比較，差異極顯著（P<0.01），與65℃解凍效果比較差異不顯著（P>0.05），與70℃解凍效果比較差異顯著（P<0.05），說明水溫偏低或偏高對精子的復蘇都不利。
2.2.4不同濃度解凍液對解凍后精液存活指數的影響 在30℃的溫度條件下保存解凍后活力0.5以上的精液，結果含有1.3%、2.2%、2.9%檸檬酸鈉解凍液的存活指數分別為2.8、3.6、3.2，以含2.2%，檸檬酸鈉解凍液的存活指數最高。
3、受胎效果試驗
選用C配方稀釋液制作冷凍精液顆粒，對母羊進行受胎效果試驗，并把輸入鮮精和自然交配作為對照組，結果第一情期受胎率凍精組為71.21%，鮮精組為75.24%，自然交配組為75.56%，凍精組的受胎率分別比鮮精組和自然交配組低4.03%和4.35%，但組間差異不顯著（P>0.05），結果見表2。
表2 :冷凍精液受胎效果及比較 （單位：只、%）
| 組別 | 試驗種類 | 顆粒種類 | 配種羊數 | 調查羊數 | 受胎羊數 | 受胎率 | 產羔母羊數 | 產羔數 | 產羔率 | |
| 試 驗 組 |
冷凍精液 | 初試 | 波爾山羊 | 88 | 78 | 54 | 69.23 | 48 | 103 | 214.58 |
| 本地山羊 | 46 | 44 | 30 | 68.18 | 25 | 54 | 216.00 | |||
| 中試 | 波爾山羊 | 2210 | 1100 | 786 | 71.45 | 750 | 1637 | 218.27 | ||
| 本地山羊 | 1860 | 900 | 641 | 71.22 | 630 | 1300 | 206.35 | |||
| 小計 | 4204 | 2122 | 1511 | 71.21 | 1453 | 3094 | 212.94 | |||
| 對照組 | 鮮精 | 本地山羊 | 450 | 315 | 237 | 75.24 | 231 | 486 | 205.06 | |
| 自交 | 本地山羊 | 34 | 34 | 75.56 | 34 | 74 | 211.43 | |||
3.1母羊年齡、胎次對受胎效果的影響 因母羊的年齡與胎次呈強正相關，所以年齡與胎次的影響是基本一致的。將母羊按1歲以下，1—2歲、2—3歲、3歲以上分成4組，其冷凍精液配種第一情期受胎率分別為63.04%（46/29）、76.89%（212/163）、71.08%（83/59）和63.79%（58/37）。將母羊按處女1—3胎、4—6胎、6胎以上分成4組，受胎率分別為62.69%（67/42）、74.38%（160/119）、72.11%（147/106）和68.00%（25/17），以1—2歲，1—3胎受胎率最高， 2—3歲，4—6歲胎次之，但統計分析，各組組間差異不顯著（P>0.05）。
3.2不同輸精方法對受胎效果的影響 統計子宮頸口輸精259只母羊，結果有204只受胎，受胎率78.76%，比陰道輸精的60%（140/84）高18.76%，二者比較，差異極顯著（P<0.01）。
3.3不同顆粒數對受胎效果的影響 對38只母羊進行2顆粒子宮頸口輸精，結果有30只受胎，受胎率78.95%，另59只母羊進行1顆粒子宮頸口輸精，結果有41只受胎，受胎率69.49%，前者比后者高9.46%（P>0.05）。
4、討論與分析
4.1 我們根據波爾山羊鮮精按1∶50比例稀釋，每羊輸入0.5毫升能夠保持較高受胎率的結果，凍精顆粒一律用0.5毫升解凍液進行再稀釋，使母羊輸入的有效精子數在0.2億左右（1顆粒）。仍取得了69.49%的受胎率，但比輸入0.4億（2顆粒）的受胎率降低了9.46（P>0.05）,這與鮮精類似，試驗取得的結果是一致的。因此建議波爾山羊凍精顆粒內的有效精子數以0.3—0.4億為宜。
4.2 在波爾山羊凍精顆粒的制作過程中，要保證平衡后精液的溫度不得回升，否則往往影響凍精顆粒的解凍活率。
4.3 處女羊由于個體較小，使用開腔器困難，而采用陰道輸精法又影響受胎效果，有待進一步探討。
