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胚胎移植

2022-04-06 16:55:36

胚胎移植又稱受精卵移植，就是將1頭母畜(供體)的受精卵移植到另一頭母畜(受體)的子宮內，使之正常發育，俗稱“借腹懷胎”。
　　(一)胚胎移植的意義
　　1．充分發揮優良母牛的繁殖潛力一般情況下，1頭優良成年母牛一年只能繁殖1頭犢牛，應用胚胎移植技術，一年可得到幾頭至幾十頭優良母牛的后代，大大加速了良種牛群的建立和擴大。
　　2．誘發肉牛產雙胎對發情的母牛配種后再移植一個胚胎到排卵對側子宮角內。這樣配種后未受孕的母牛可能因接受移植的胚胎而妊娠，而配種后受母牛則由于增加了一個移植的胚胎而懷雙胎。另外，也可對未配種的母牛在兩側子宮角各移植一個胚胎而懷雙胎，從而提高生產效率。
　　3．應用胚胎移植還可以減少肉用繁殖母牛的飼養頭數，可以代替種畜的引進和保存品種資源等。
　　(二)胚胎移植的生理基礎
　　1．母牛發情后生殖器官的孕向發育在發情后的最初一段時期(周期性黃體期)，不論是否已受精，母牛生殖系統均處于受精后的生理狀態之下，在生理現象上，妊娠與未孕并無區別。所以，發情后的母牛生殖器官的孕向變化，是進行胚胎移植時使不配種的受體母牛可以接受胚胎，并為胚胎發育提供各種條件的主要生理學依據。
　　2．早期胚胎的游離狀態胚胎在發育早期有相當一段時間(附植之前)是獨立存在的，它的發育基本上靠本身貯存的養分，還未和子宮建立實質性聯系。所以，在離開活體情況下，在短時間內可以存活。當放回與供體相同的環境中，即可繼續發育。
　　3.胚胎移植不存在免疫問題受體母畜的生殖道(子宮和輸卵管)對于具有外來抗原物質的胚胎和胎膜組織，一般來說，在同一物種之內，并沒有免疫排斥現象，這一點對胚胎由一個體移植給另一個體后而繼續發育極為有利。
　　4．胚胎和受體的聯系移植的胚胎，在一定時期會和受體子宮內膜建立生理上和組織上的聯系，從而保證了以后的正常發育。此外，受體并不會對胚胎產生遺傳上的影響，不會影響胚胎固有的優良性狀。
　　(三)胚胎移植的操作原則
　　1．胚胎移植前后所處環境的一致性即胚胎移植后的生活環境和胚胎的發育階段相適應。包括生理上的一致性(即供體和受體在發情時間上的一致性)和解剖位上的一致性(即移植后的胚胎與移植前所處的空間環境的相似性)以及種屬一致性(即供體與受體應屆同一物種，但并不排除種間移植成功的可能性)。
　　2．胚胎收集期限胚胎收集和移植的期限(胚胎的日齡)不能超過周期黃體的壽命，最遲要在周期黃體退化之前數日進行移植。通常是在供體發情配種后3一s日內收集和移植胚胎。
　　3.在全部操作過程中，胚胎不應受到任何不良因素(物理的、化學的、微生物的)的影響而危及生命力。移植的胚胎必須經鑒定并認為是發育正常者。
　　(四)胚胎移植的基本程序胚胎移植的基本程序包括供體超排與授精，受體同期發情處理、采卵、檢卵和移植。關于超排和同期發情處理在前面已有敘述，本書僅介紹采卵、檢卵和移植。
　　1．胚胎回收(采卵) 從供體收集胚胎的方法肴手術法和非手術法兩種。
　　(1)手術法按外科剖腹術的要求進行術前準備。手術部位位于右肋部或腹下乳房至臍部之間的腹白線處切開。伸進食指找到輸卵管和子宮角，引出切口外。如果在輸精后3—4天期間釆卵，受精卵還未移行到子宮角，可采用輸卵管沖卵的方法。將一直徑2毫米，長約10厘米的聚乙烯管從輸卵管腹腔口插入2—3厘米，另用注射器吸取5—10毫升30℃左右沖卵液，連接7號針頭，在子宮角前端刺人，再送人輸卵管峽部，注入沖卵液。穿刺針頭應磨鈍，以免損傷子宮內膜；沖洗速度應緩慢，使沖洗液連續地流出。如果在輸精后5天收胚，還必須做子宮角沖胚。即用10一15毫升沖卵液由宮管結合部子宮角上部向子宮角分叉部沖洗。為了使沖卵液不致由輸卵管流出，可用止血鉗夾住宮管結合部附近的輸卵管，在于宮角分叉部插入回收針，并用腸鉗夾住子宮與回收針后部，固定回收針，并使沖卵液不致流人子宮體內。
　　(2)非手術法非手術采卵一般在輸精后5—7天進行。可采用二路導管的沖卵器。二路式沖卵器是由帶氣囊的導管與單路管組成。導管中一路為氣囊充氣用，另一路為注入和回收沖卵液用。
　　導管中插1根金屬通桿以增加硬度，使之易于通過子宮頸。一般用直腸把握法將導管經子宮頸導人子宮角。為防止子宮頸緊縮及母牛努責不安，采卵時可在腰薦或尾椎間隙用2％的普魯卡因或利多卡因5—10毫升進行硬膜外腔麻醉。操作前清洗外陰部并用酒精消毒。為防止導管在陰道內被污染，可用外套膜(有商品出售)套在導管外，當導管進人子宮頸后，扯去套膜。將導管插入一側子宮角后，從充管向氣囊充氣，使氣囊脹起并觸及子宮角內壁，以防止沖卵液倒流。然后抽出通桿，經單路管向子宮角注入沖卵液，每次15—50毫升，沖洗5—6次，并將沖卵液收集在漏斗形容器中。為更多地回收沖卵液，可在直腸內輕輕按摩子宮角。用同樣方法沖洗對側子宮角。
　　沖卵液多數為組織培養液，如林格氏液、杜氏磷酸鹽緩沖液(PE)、布林斯特氏液(BMOC-3)和TCM—199等。常用的為杜氏磷酸鹽緩沖液，加入0．4％的牛血清白蛋白或1％一10％犢牛血清。
　　沖卵液溫度使用時應為35—37℃，每毫升要加入青霉素1000國際單位，鏈霉素500—1000微克，以防止生殖道感染。
　　2．胚胎檢查
　　(1)檢卵將收集的沖卵液于37℃溫箱內靜置10一15分鐘。胚胎沉底后，移去上層液。取底部少量液體移至平皿內，靜置后，在實體顯微鏡下先在低倍(10一20倍)下檢查胚胎數量，然后在較大倍數(50—100倍)下觀察胚胎質量。
　　(2)吸卵吸卵是為了移取、清洗、處理胚胎，要求目標準確，速度快，帶液量少，無丟失。吸卵可用1毫升的注射器裝上特別的吸頭進行，也可使用自制的吸卵管。
　　(3)胚胎質量鑒定正常發育的胚胎，其中細胞(卵裂球)外形整齊，大小一致，分布均勻，外膜完整。無卵裂現象(未受精)和異常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。
　　3．胚胎移植
　　(1)手術移植先將受體母牛作好術前準備。已配種母牛，在右肋部切口，找到非排卵側子宮角，再把吸有胚胎的注射器或移卵管刺入子宮角前端，注人胚胎；未配母牛在每側子宮角各注入一個胚胎；然后將子宮復位，縫合切口。
　　(2)非手術移植非手術移植一般在發情后第六至第九天(即胚泡階段)進行，過早移植會影響受胎率。在非手術移植中采用胚胎移植槍和0．25毫升細管移植的效果較好。將細管截去適量，吸入少許保存液，吸一個氣泡，然后吸人含胚胎的少許保存液，吸人一個氣泡，最后再吸取少許保存液。將裝有胚胎的吸管裝入移植槍內，通過子宮頸插入子宮角深部，注入胚胎。非手術移植要嚴格遵守無菌操作規程，以防生殖道感染。